Введение. Лавр благородный – Laurus nobilis L., растение, листья которого широко используются в кулинарии как пряно-ароматическое. Листья растения также находят широкое применение в качестве лекарственного в народной медицине [1].

Вместе с тем, опубликовано большое количество научных исследований, подтверждающих наличие у растения выраженных антибактериальных свойств, связанных с присутствием в листьях довольно высокого содержания эфирного масла. Установлено, что листья L. nobilis L. содержат более 80 летучих компонентов, представленных в основном моноциклическими монотерпенами, причём доминирующим является 1,8-цинеол, известный своим высоким антибактериальным действием [2].

Имеется ряд работ, подтверждающих антиоксидантную активность растения [3-5]. Показано, что водно-этанольный экстракт L. nobilis L. за счёт наличия флавоноидов, имеет выраженные антиоксидантные и ангиопротекторные свойства, оказывает нормализующее действие на углеводный обмен, гастропротективное, протекторное действие на инсулярный аппарат [6].

Исследование эфирного масла L. nobilis L. показало, что оно может использоваться в пищевой и фармацевтической промышленности в качестве антиоксиданта и противомикробного агента. В частности, образцы эфирного масла листьев лавра благородного из Сербии и России были протестированы на предмет антиоксидантной и противомикробной активности. Образец из Сербии обладал более выраженным антиоксидантным и противомикробным действием, чем образец из России. Образец из России оказался эффективным в отношении все протестированных бактерий и дрожжей, но не обладал каким-либо ингибирующим действием в отношении грибов [7].

Проводилось сравнительное исследование антиоксидантной и противогрибковой активности эфирных масел L. nobilis L., шалфея лекарственного (Salvia officinalis L.) и лаванды зубной (Lavandula dentata L.) и их основного монотерпенового компонента – 1,8-цинеола против Aspergilluscarbonarius. Химический состав тестируемых эфирных масел проводили с помощью метода газовой хроматографии – масс-спектрометрии. Полученные результаты показали, что эфирное масло L. nobilis L. проявляло лучшую антиоксидантную активность, чем S. officinalis и L. dentatа и содержало самое высокое количество фенолов. Кроме того, эфирное масло L. nobilis L. подавляло скорость роста A. carbonarius намного больше, чем L. dentata L. и S. оfficinalis L. с процентным соотношением, равным 47,82, 37,92 и 31,71%, соответственно. При контактном анализе эфирные масла L. nobilis L. и L. dentata L. проявляли более высокую противогрибковую и антиоксидантную активность, чем S. оfficinalis L., с минимальной ингибирующей концентрацией (МИК) примерно 0,3, 0,3 и 0,5% соответственно. МИК 1,8-цинеола (0,5%) была примерно вдвое выше, чем МИК L. nobilis L. и L. dentata L. Следовательно, его мощная биологическая активность обеспечивалась синергизмом между основным и сопутствующими компонентами [8].

Проводилось изучение антимикробной активности эфирных масел листьев L. nobilis L. и Prunus armeniaca L. флоры Марокко. Эфирные масла, полученные из листьев указанных видов из Марокко, были оценены на предмет возможного синергического антибактериального и противогрибкового действия in vitro с некоторыми традиционными противомикробными препаратами, а именно флуконазолом, ципрофлоксацином и ванкомицином. Химический состав образцов эфирных масел был исследован методом газовой хроматографии-масс-спектрометрии. Основными летучими соединениями, обнаруженными в L. nobilis L., были эвкалиптол (40,85%), α-терпинилацетат (12,64%) и метилэвгенол (8,72%), в то время как у P. armeniaca L. преобладал (Z) -фитол (27,18%), пентакозан (15,11%), нонакозан (8,76%) и бензальдегид (7,25%). Что касается антимикробной активности, оба эфирных масла значительно подавляли все тестируемые микроорганизмы. Эфирное масло из листьев L. nobilis L. обладало наивысшей активностью с минимальными ингибирующими концентрациями (МПК) от 1,39 до 22,2 мг/мл для бактерий и от 2,77 до 5,55 мг/мл для дрожжей. Напротив, комбинация исследуемых эфирных масел с ципрофлоксацином, ванкомицином и флуконазолом привела к заметному снижению их индивидуальных МИК. Фактически, из 32 протестированных взаимодействий 23 (71,87%) продемонстрировали полный синергизм и 9 (28,12%) частичный синергетический эффект. Эфирное масло из L. nobilis L. продемонстрировало наивысший синергетический эффект со всеми использованными антибиотиками, со значениями индекса фракционной ингибирующей концентрации (FIC) в диапазоне от 0,266 до 0,75 для бактерий и от 0,258 до 0,266 для дрожжей. Синергическое взаимодействие между исследуемыми эфирным маслами и антибиотиками может составлять многообещающие противоинфекционные средства, необходимые для лечения заболеваний, вызванных устойчивым к антибиотикам патогеном [9].

Исследованы цитотоксический и генотоксический потенциалы водного извлечения из листьев L. nobilis L. Результаты показали, что водное извлечение из листьев L. nobilis L. не обладало какой-либо генотоксической активностью, но цитотоксическая активность наблюдалась в двух использованных экспериментальных моделях. Извлечение обладало антипролиферативным действием, обнаруживаемым по снижению митотического индекса и соотношения полихроматических/нормохроматических эритроцитов (PCE/NCE). Испытания также продемонстрировали большое количество клеток, подвергающихся апоптозу и имеющих ядерные аномалии, связанные с процессами гибели клеток. Эти результаты можно объяснить наличием фенольных соединений, сапонинов, флавоноидов и алкалоидов, обнаруженных при фитохимическом анализе извлечения из листьев L. nobilis L. Следовательно, водное извлечение из листьев L. nobilis L. в форме, обычно используемой населением, не представляет рисков, связанных с его генотоксическим потенциалом, а также содержит компоненты с апоптотическим потенциалом [10].

Оценена токсическая и противоопухолевая активность водного экстракта листьев L. nobilis L. у мышей, трансгенных по ВПЧ16. Настоящее исследование направлено ​​на оценку in vivo эффективности и токсичности экстракта лавра для печени на модели рака, индуцированного ВПЧ16, у трансгенных мышей. В ходе исследования установлено, что экстракт не предотвращал прогрессирование кожных поражений, вызванных ВПЧ16. У обработанных животных дикого типа выявлен гепатит легкой степени, в то время как трансгенные животные потеряли в весе. Однако по маркерам гематологического, биохимического и печеночного оксидативного стресса изменений не было [11].

Изучена способность экстракта L. nobilis L. и его основного компонента - эвкалиптола модулировать воспалительный сигнальный путь, вызванный Propionibacterium acnes. Экстракт L. nobilis L. значительно подавлял экспрессию опосредованных P. acnes провоспалительных цитокинов, таких как IL-1β, IL-6 и NLRP3. Также обнаружено, что L. nobilis L. ингибирует воспалительный фактор транскрипции NF-κB в ответ на P. acnes. Кроме того, эвкалиптол, который является основным компонентом L. nobilis L., постоянно ингибирует индуцированные P. acnes воспалительные сигнальные пути. Более того, L. nobilis L. значительно уменьшал воспаление, вызванное P. acnes, на мышиной модели акне. Таким образом, сделано предположение, что L. nobilis L. имеет терапевтическую ценность для улучшения состояния кожи при воспалении вызванном P. Acnes [12].

Установлено влияние разных видов сушки листьев L. nobilis L. на общее содержание фенольных соединений и их антиоксидантную активность. Сравнивались два метода сушки листьев L. nobilis L.: сушка с использованием микроволн (MWD) (от 180 до 900 Вт) и традиционный метод (сушка на открытом воздухе и сушка в духовке с использованием температур от 40 °C до 120 °С) и влияние. Кинетические результаты показали, что время, необходимое для сушки лаврового листа, сокращается с увеличением температуры и мощности микроволн. Сушка в микроволновой печи была намного эффективнее, чем традиционные методы (сушка на открытом воздухе и сушка в духовке). Антиоксиданты листьев L. nobilis L. лучше сохранялись при сушке на открытом воздухе и в микроволновой печи. Сушка в микроволновой печи при мощности 300 Вт в течение 130 с была наиболее эффективной комбинацией, которая обеспечила сушку листьев L. nobilis L. с самым высоким содержанием фенольных соединений и антиоксидантной активностью [13].

Определена ларвицидная активность эфирного масла листьев L. nobilis L. Эфирное масло получали из свежих листьев методом гидродистилляции. В полученном эфирном масле идентифицировано 37 компонентов, основными из которых были 1,8-цинеол и линалоол. Ларвицидную активность определяли в отношении личинок Aedes aegypti – комара, переносчик лихорадки Денге и вируса Зика. Ларвицидную активность определяли методом погружения личинок. Сезонные колебания состава и содержания эфирного масла повлияли на ларвицидную активность: весенняя LC₅₀ составляла 0,41 мг/мл и LC₉₉ 0,77 мг/мл, осенняя LC₅₀ составляла 0,60 мг/мл и LC₉₉ 1,37 мг/мл, зимняя LC₅₀ составляла 0,66 мг/мл и LC₉₉ 3,19 мг/мл и летом LC₅₀ составляла 0,91 мг/мл, а LC₉₉ - 2,50 мг/мл. Таким образом, эфирное масло, полученное весной, показало наивысшую ларвицидную активность в отношении личинок A. Aegypti [14].

Исследовано влияние экстракта листьев L. nobilis L. на жизненно важные органы у крыс с индуцированным стрептозоцином диабетом. Исследование проводилось на тридцати здоровых взрослых самцах крыс-альбиносов, разделённых поровну на 5 групп: контрольную (C), диабетическую группу (D), диабетическую группу с добавлением экстракта L. nobilis L. (DLN), группу с добавлением экстракта L. nobilis L. (LN) и диабетическую группу с добавлением акарбозы (DA).

Гистопатологически крысы группы D демонстрировали различные дегенеративные и некротические изменения в печени, поджелудочной железе и почках, тогда как крысы DLN имели почти нормальную гистологию. Иммуноокрашивание инсулина в бета-клетках поджелудочной железы было снижено в группе D по сравнению с группой C, тогда как группа DLN была аналогична группе C. Концентрация глюкозы значительно снизилась у крыс с диабетом, получавших экстракт L. nobilis L. и акарбозу (p <0,05). Кроме того, уровни аспартатаминотрансферазы (AST), гамма-глутамилтрансферазы (GGT) и аланинаминотрансферазы (ALT) были значительно снижены у крыс с диабетом, получавших L. nobilis L. и акарбозу, по сравнению с группой D (p <0,05). Результаты этого исследования показали, что экстракты листьев L. nobilis L. оказывают ценное влияние на уровень глюкозы в крови и улучшают регенерацию островков поджелудочной железы, а также восстанавливают измененные ферменты печени, мочевину, креатинкиназу, общий уровень белка, кальция и ферритина до уровня, близкого к значению [15].

Показано влияние происхождения листьев L. nobilis L. на химический профиль и антимикробную и антиоксидантную активность эфирных масел, собранных в двух разных лесных регионах Марокко: Мулай-Абдессалам (север Марокко) и Бени Меллал Тагзирт (Среднеатласские леса). Химический состав эфирного масла установлен методом газожидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием. Антиоксидантные эффекты эфирных масел были проанализированы с использованием улавливания радикалов 2,2-ди (4-трет-октилфенил)-1-пикрилгидразилом (DPPH), восстанавливающей/антиоксидантной способности железа (FRAP) и эквивалентной антиоксидантной способности с использованием тролокса (ABTS). Антимикробная активность эфирного масла была проведена против четырех грибов древесной гнили, трех плесени и четырех штаммов бактерий. Анализ ГХ-МС выявил присутствие 1,8-цинеола, линалоола, миртеналья, γ-терпинеола, сабинена, эвгенола, α-пинена и β-пинена в качестве основных соединений.

 Установлено, что урожайность листьев L. nobilis L. оказалась наибольшей в лесу Тагзирт. Кроме того, было обнаружено, что эфирное масло из леса Тагзирт обладает высоким антиоксидантным потенциалом. Эфирное масло из леса Тагзирт в регионе Бени-Меллал, обладало наибольшей эффективностью против выбранных микроорганизмов [16].

Проведён сравнительный анализ антимикробной активности и антиоксидантного потенциала эфирного масла L. nobilis L. с эфирными маслами лемонграсса (Cymbopogon citratus) и лимонного мирта (Backhousia citriodora). Было обнаружено, что эфирное масло L. nobilis L. проявляло наибольшую противомикробную активность против выбранных бактерий Streptococcus saprophyticus (ATCC 49619), Streptococcus aureus (ATCC 22923), Streptococcus pyogenes (ATCC 29436), Pseudomonas Eruginosa (ATCC 13048), Klebsiellapneumoniae (ATCC 13048), E. coli (ATCC 22922) с МИК от 7,8 до 250 мкг/мл. Наибольшую антиоксидантную активность проявили эфирные масла B. citriodora и L. nobilis L. [17].

Проведено сравнительное изучение антибактериальной активности эфирных масел из 10 ароматических растений некоторых турецких и алжирских лекарственных растений: Thymusfontanesii, Thymusvulgaris, Menthapulegium, Eugeniacaryophyllata, Origanumvulgare, L. nobilis, Salviaofficinalis, Pellargonium, Lavandulavera, Cinnamomumaromaticum. Результаты показали больший антибактериальный эффект всех образцов эфирных масел против грамположительных, чем грамотрицательных бактерий. Pseudomonas aeruginosa была единственной бактерией, не восприимчивой к маслам L. nobilis, Salviaofficinalis, Pellargonium, Lavandulavera и Mentha pulegium. Наибольшую активность проявило масло Cinnamomum aromaticum [18].

Проведена оценка антибактериальной и антиоксидантной активности фенольных соединений и алкалоидов листьев L. nobilis L. Результаты антиоксидантной активности показывают, что, хотя концентрация алкалоидов оказалась ниже, чем полифенолов их антиоксидантная активность была выше [19].

Результаты антибактериальной активности экстрактов L. nobilis L. позволили выявить, что наибольшее ингибирование было зарегистрировано для экстракта алкалоидов против стафилококков, штаммов, вызывающих пищевое отравление. Однако фенольные соединения L. nobilis L. показали лучшую активность против фитопатогенных штаммов [20].

Выявление всё новых терапевтических свойств растения свидетельствует о неполностью нераскрытом его терапевтическом потенциале.

 Однако, несмотря на внушительный терапевтический потенциал у растения, в отечественной научной медицине его не используют, что в первую очередь связано с отсутствием нормативной документации на сырьё.

Учитывая сказанное, целью настоящего исследования явилось описание спектра видов фармакологической активности L. nobilis L. и выбор оптимального экстрагента для извлечения эфирного масла из листьев исследуемого объекта.

Материалы и методы исследования. В качестве исследуемого материала взяты высушенные листья L. nobilis L., собранные на территории Краснодарского края.

Для выбора оптимального экстрагента, способного обеспечить максимальный выход действующих компонентов, использованы фреоны – метоксинонафторбутан (Novec 7100) и фторкетон. В качестве экстрагента сравнения взят н-гексан.

В качестве сырья использованы высушенные, измельчённые листья L. nobilis L. Для извлечения эфирного масла из листьев L. nobilis L. 1,0 г (точная навеска) сырья заливали 10 мл соответствующего экстрагента, плотно укупоривали и экстрагировали методом мацерации при комнатной температуре в течение суток. По истечении указанного времени полученное извлечение фильтровали через бумажный фильтр «синяя лента». Полученные извлечения непосредственно использовали для хроматографирования.

Методом исследования явился метод хромато-масс-спектрометрии.

Хроматографирование проводили на газовом хроматографе – масс-спектрометре – GCMS-QP2010 Ultra, «Shimadzu», Япония. Ионизация осуществляется в режиме электронного удара, детекция по полному ионному току (SCAN) в режиме программируемых температур.

Условия хроматографирования:

Колонка капиллярная кварцевая, размером 30 mL × 0,25 mmID × 0,25 μm (ZebronZB-5MS);

Скорость газа-носителя (гелий) - 3,0 мл/мин;

Температура колонки от +70 С° (изотерма 4 мин) до 200 С° (изотерма 15 мин), со скоростью подъёма температуры 4 град/мин;

Температура испарителя + 210 С°;

Температура ионного источника + 200 С°;

Температура интерфейса + 250 С°;

Напряжение на детекторе – 0,88кВ;

Поток эмиссии – 60 µА;

Объём пробы – 1µl;

Диапазон сканирования от m/z 35 – 500 Da, (скорость сканирования 1666/0,3 сек).

Идентификацию компонентов проводили путём сравнения масс-спектров с таковыми, имеющимися в распоряжении электронной библиотеки Nist 11.

Результаты и их обсуждение. Хроматограммы, полученные при хроматографировании образцов представлены на рисунках 1-3.

На всех представленных хроматограммах видно, что доминирует 3 основных компонента, со временем удерживания 7 мин, 17,6 мин и 19,6 мин. Путём сопоставления масс-спектров зарегистрированных веществ с библиотечными данными масс-спектров базы данных NIST 11 установлено, что найденные вещества являются 1,8-цинеолом, альфа-терпенилацетатом и метилэвгенолом соответственно.

Результаты расшифровки хроматограмм представлены на рисунках 4-6.

Помимо 3 доминирующих компонентов, определены также сопутствующие соединения, присутствующие во всех извлечениях и содержание которых во фреоновых извлечениях составило более 1,0%. Перечень доминирующих и сопутствующих компонентов, их процентное содержание во фреоновых извлечениях представлено в таблице 1.

Сравнивая данные площадей пиков найденных компонентов, представленные в таблице 1 можно заключить, что наибольший выход составных эфирных масел обеспечивает метоксинонафторбутан, несколько меньше н-гексан. Однако, учитывая токсичность н-гексана и абсолютную безвредность метоксинонафторбутана, целесообразным является использование второго в качестве экстрагента эфирного масла. Диаграмма сравнительной экстрагирующей способности использованных экстрагентов представлена на рисунке 7. Для простоты вычислений громоздкие площади пиков были прологарифмированы.

Таким образом, методом хромато-масс-спектрометрии определён состав эфирного масла, выделенного фреонами из листьев лавра благородного. Результаты хроматографирования показали, что в полученных фреоновых извлечениях, доминирующими оказались 1,8-цинеол (эвкалиптол), альфа-терпенилацетат и метилэвгенол, что близко по составу к нативному эфирному маслу, согласно литературным данным.

Заключение. Показана перспективность использования фреонов в качестве агентов для получения эфирного масла из листьев лавра благородного. В ходе хроматографирования установлено, что оптимальным экстрагентом является метоксинонафторбутан, экстрагирующий летучие компоненты с наибольшим выходом, по сравнению с фторкетоном и н-гексаном, кроме того, метоксифторбутан нетоксичен по сравнению с н-гексаном.