ДЕЙСТВИЕ ЛЮТЕИН-ЗЕАКСАНТИН СОДЕРЖАЩЕЙ ДОБАВКИ НА МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ И БИОХИМИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ КРОВИ ПЕРЕПЕЛОВ
Aннотация
Приведены результаты морфологических и биохимических показателей крови, а также, биохимический состав яиц перепелов при использовании в их диете различных доз лютеин-зеаксантин содержащей добавки.
Введение. В последние годы всё большую популярность приобретают способы получения пищевых продуктов с заданным химическим свойством и биологической активностью. Данное направление «пищевого дизайна» даёт возможность получать так называемые функциональные продукты питания – обогащенные макро- и микроэлементами, эссенциальными жирными кислотами, витаминами, ксантофиллами и т.п. Особый интерес вызывают ксантофиллы – лютеин и зеаксантин, в связи с их биологической ролью в организме человека и животных. Оба каротиноида, лютеин и зеаксантин, называются «макулярными пигментами», т.к. они входят в состав жёлтого пятна (macula lutea) сетчатки глаза человека в соотношение приблизительно 4:1 [4, 6]. Антиоксидантные свойства данных ксантофиллов в сочетании с их способностью поглощать излучение синего спектра света, защищают пигментный эпителий и слой хориокапилляров сетчатки от повреждающего действия окислителей, свободных радикалов, нейтрализуя активные формы кислорода [7]. Учитывая тот факт, что каротиноиды не синтезируются в организме животных и человека и должны поступать с пищей, а также то, что биодоступность эфира лютеина яичного желтка многим выше, чем лютеина из других пищевых источников и лютеина, полученного путём химического синтеза [5], актуальным является получение функциональных продуктов питания, в частности, мяса птиц и яиц, обогащенных лютеином и зеаксантином.
Проведенные ранее эксперименты по обогащению куриных (Л.А.Дейнека и др., 2007; А.А.Шапошников и др., 2009) и перепелиных (В.И.Дейнека и др., 2010; А.А.Шапошников и др., 2011) яиц лютеином и зеаксантином, используя биологически активные растительные добавки, показали их положительное влияние на сохранность, продуктивность, яйценоскость, физиолого-биохимический статус птиц, а также накопление каротиноидов в желтке яиц.
Целью нашего исследования было изучение влияния различных доз ксантофиллов лепестков бархатцев (Tagetes erécta L.) и чашечек физалиса (Physalis alkekengi) на физиологическое состояние, морфологические и биохимические показатели крови перепелов, а также, химический состав яиц.
Материалы и методы. Опыт был проведен в фермерском хозяйстве Ивнянского района Белгородской области в январе-феврале 2012 года на перепелках-несушках породы «Фараон», в котором было изучено действие на организм птицы различных доз (при неизменном соотношение лютеина и зеаксантина – 4:1) смеси сухих лепестков бархатцев и чашечек физалиса в составе ОР (таблица 1).
Таблица 1
Схема опыта
Table 1
The experimental setup
Группа | Схема кормления | Доза ксантофиллов, мг на перепелку в сутки | Продолжительность, сутки* |
Подготовительный период | |||
I-V | ОР (основной рацион) | – | 10 |
Основной период | |||
I – контроль | ОР | – | 14 |
II – опыт | ОР+4 мг (Б)+1 мг (Ф) | 0,06 | 14 |
III – опыт | ОР+8 мг (Б)+2 мг (Ф) | 0,12 | 14 |
IV – опыт | ОР+12 мг (Б)+3 мг (Ф) | 0,18 | 14 |
V – опыт | ОР+16 мг (Б)+4 мг (Ф) | 0,24 | 14 |
Завершающий период | |||
I-V | ОР | – | 16 |
Птиц для эксперимента отобрали в суточном возрасте и разделили на пять групп по 20 животных в каждой. Продолжительность опыта составила 40 суток: адаптационный период – 10, основной – 14 и завершающий – 16 суток.
Основной рацион (ОР) был представлен специальным комбикормом для перепелок-несушек, сбалансированным по основным питательным, минеральным и биологически активным веществам. Потребление воды не ограничивали.
Для опыта были приготовлены высушенные и измельченные:
- лепестки цветков бархатцев, содержавшие по спектрофотометрическим данным 12,5±1,5мг ксантофиллов на 1г добавки (в пересчете на неэтерефицированный лютеин);
- чашечки физалиса, по спектрофотометрическим данным содержавшие 9,0±0,3мг ксантофиллов на 1г добавки (в пересчете на неэтерефицированный лютеин).
Ежесуточно контролировали кормление птицы, её физиологическое состояние и яйценоскость.
Цельную кровь забирали на 14 сутки основного периода путем декапитации птицы (по пять перепелок от каждой группы). Цельную кровь для определения концентрации эритроцитов, гемоглобина и лейкоцитов стабилизировали раствором гепарина. Сыворотку крови получали стандартно.
Полученные образцы доставляли незамедлительно в лабораторию и анализировали с использованием полностью роботизированного иммунохимического электрохемилюминисцентного автоматического анализатора COBAS E 411 и иммунохимического анализатора OLYMPUS AU680 на базе Белгородской областной клинической больницы Святителя Иоасафа в Центре коллективного пользования НИУ «БелГУ».
Полученный цифровой материал был обработан статистически (Г.Ф.Лакин, 1980). При определении достоверной разницы между контрольной и опытными группами был использован аргумент Стьюдента. Результаты рассматривали как достоверные, начиная со значения р≤0,05.
Результаты и их обсуждение. Использование различных доз ксантофиллов в диете перепелок не оказывает существенного влияния на концентрацию эритроцитов и гемоглобина в крови птиц (таблица 2). Данные показатели находились в пределах физиологической нормы [2] и достоверных различий между ними выявлено не было.
Таблица 2
Морфологические показатели крови перепелов 24-суточного возраста
Table 2.
Morphological parameters of blood in 24-day-old quails
Показатель | Группа | ||||
I | II | III | IV | V | |
Эритроциты, 1012/л | 2,01±0,09 | 2,02±0,05 | 2,01±0,08 | 2,03±0,06 | 2,01±0,07 |
Гемоглобин, г/л | 128,2±7,6 | 128,9±2,8 | 128,9±2,1 | 129,2±0,8 | 130±1,1 |
Биохимические характеристики крови очень важны как для оценки физиологического статуса организма животного, так и для своевременной диагностики патологических состояний [3].
Содержание общего белка в сыворотке крови перепелов контрольной и опытных групп находилось в пределах физиологической нормы для данной возрастной группы птиц и не имело достоверных различий (таблица 3). Концентрация альбумина и белков глобулиновых фракций перепелов контрольной и опытных групп, так же не имела достоверных различий. Это может свидетельствовать о том, что различные дозы ксантофиллов в диете перепелов не оказывают отрицательного влияния на содержание общего белка и белковых фракций в сыворотке крови птиц.
Таблица 3
Биохимические показатели сыворотки крови перепелов 24-суточного возраста
Table 3.
Biochemical parameters of serum in 24-day-old quails
Показатель | Группа | |||||
I | II | III | IV | V | ||
Общий белок, г/л | 51,3±3,3 | 51,1±2,3 | 49,9±2 | 53,4±3 | 52,8±2,4 | |
Фракции белка, %: альбумин | 58,3±2,3 | 57,6±2,2 | 58,7±1,3 | 59,1±1 | 59,1±0,8 | |
альфа1-глобулины | 5,2±0,3 | 4,7±0,4 | 5±0,2 | 5,3±0,3 | 5,3±0,4 | |
альфа2-глобулины | 9,7±0,8 | 9±0,9 | 9,3±0,8 | 9±0,6 | 9,2±0,3 | |
бета-глобулины | 19,7±0,4 | 19,7±0,9 | 20±0,4 | 19,3±1,8 | 19,5±0,9 | |
гамма-глобулины | 7,2±1,8 | 8,9±2,6 | 7,5±2 | 6,6±1,2 | 7±0,5 | |
Мочевая кислота, ммоль/л | 270±14,3 | 229,3±9,7* | 233±8,2* | 244,7±17,8 | 244,4±8,7* | |
Холестерол, моль/л | 2,27±0,3 | 2,11±0,22 | 2,34±0,32 | 2,22±0,18 | 2,21±0,2 | |
ТАГ, ммоль/л | 0,53±0,06 | 0,53±0,07 | 0,52±0,07 | 0,52±0,09 | 0,48±0,08 | |
ЛПВП, ммоль/л | 1,73±0,09 | 1,74±0,07 | 1,73±0,05 | 1,73±0,08 | 1,72±0,14 | |
ЛПНП, ммоль/л | 0,48±0,02 | 0,49±0,04 | 0,49±0,08 | 0,48±0,03 | 0,47±0,05 | |
ЛПОНП, ммоль/л | 0,31±0,04 | 0,28±0,02 | 0,27±0,03 | 0,27±0,01 | 0,26±0,01 | |
Кальций, ммоль/л | 2,78±0,15 | 2,69±0,09 | 2,43±0,27 | 2,4±0,05* | 2,38±0,15* | |
Фосфор, ммоль/л | 1,93±0,07 | 1,78±0,09* | 1,51±0,12* | 1,48±0,07*** | 1,41±0,03** | |
Калий, ммоль/л | 11,3±0,9 | 10,9±0,7 | 10,9±0,3 | 10,6±0,6 | 10,9±0,4 | |
Хлор, ммоль/л | 107,3±5,6 | 104,7±5 | 103,1±2,4 | 107,9±3,1 | 104±6 | |
Витамин А, мкмоль/л | 0,85±0,05 | 1,03±0,06* | 1,14±0,07** | 2,03±0,06*** | 1,23±0,04*** | |
Витамин Е, мкмоль/л | 0,006±0,001 | 0,01±0,001* | 0,01±0,002* | 0,009±0,002* | 0,009±0,001* | |
Здесь и далее: * p < 0,05; ** p < 0,001; *** p < 0,0001
Определение концентрации мочевой кислоты в сыворотке крови очень важно, т.к. в отличие от млекопитающих у птиц именно она является конечным продуктом диссимиляции азотсодержащих соединений. Это связано с тем, что мочевина, как вещество хорошо растворимое в воде, отрицательно влияла бы на развитие эмбриона своим осмотическим давлением. Мочевая кислота и её соли в воде практически не растворяются и не влияют на осмотические свойства жидкости в яйце [1].
Добавление к ОР птиц добавки в различной концентрации приводит к достоверному снижению концентрации мочевой кислоты в сыворотке крови птиц опытных групп, получавших растительные ксантофиллы в дозе 0,06 мг на животное в сутки на 15,1% (p<0,05), в дозе 0,12 мг на животное в сутки на 13,7% (p<0,05), в дозе 0,24 мг на животное в сутки на 9,5% (p<0,05). Полученные данные могут свидетельствовать, как об усилении синтетических процессов в обмене белков, так и об оптимизации работы выводящей системы птиц.
Такие показатели как триацилглицеролы (ТАГ), холестерол, транспортные формы липидов – липопротеины высокой плотности (ЛПВП), липопротеины низкой плотности (ЛПНП), липопротеины очень низкой плотности (ЛПОНП), отражающие интенсивность метаболизма липидов в организме животного, у экспериментальных перепелов находились в пределах физиологической нормы для данной возрастной группы птиц и достоверных различий по показателями в контрольной и опытных группах не выявлено (таблица 3).
Наряду с показателями белкового и липидного обменов значимыми являются показатели минерального обмена. Наибольший интерес представляют макроэлементы кальций и фосфор как компоненты, присутствующие во всех тканях и органах и участвующих в ряде важнейших биохимических процессах. Уровень кальция и фосфора в сыворотке крови отражает обеспеченность ими организма птиц.
Проведенные исследования показали, что добавление в рацион перепелов ксантофиллов в дозе 0,18 и 0,24 мг на животное в сутки ведет к достоверному (p<0,05) снижению концентрации кальция на 13,7 и 14,4% соответственно по сравнению с контролем. Уровень фосфора у птиц опытных групп также снизился по сравнению с контролем во II опытной группе на 7,77 (p<0,05), в III группе – на 21,8 (p<0,05), в IV группе – на 23,3 (p<0,0001), в V группе – на 26,9% (p<0,001). Тем не менее, содержание указанных макроэлементов оставалось в пределах физиологической нормы, более того, отношение кальций/фосфор оставалось в оптимальном диапазоне – от 1,5 до 3,0 у перепелов всех опытных групп.
Полученные данные можно объяснить интенсификацией минерального обмена у птиц опытных групп, конверсией макроэлементов в скорлупу яиц, что согласуется с результатами яйценоскости.
Помня об антиоксидантной роли ксантофиллов, вследствие наличия в молекуле сопряженных двойных связей, важно было изучить влияние добавки на содержание общеизвестных природных ингибиторов окисления – витамины Е и А в крови птиц. Как видно из таблицы 3, содержание ретинола и токоферола в крови перепелов всех четырёх опытных групп существенно и достоверно повысилась по сравнению с контролем. Так, концентрация витамина А в сыворотке крови птиц II и III опытных групп увеличилась на 21,2 (p<0,05) и 34,1% (p<0,001), а в IV и V группах – в 2,4 (p<0,001) и в 1,4 раза (p<0,001) соответственно по сравнению с контролем. Применение в диете перепелов растительных ксантофиллов в дозах 0,06 и 0,12 мг на животное в сутки, привело к достоверному повышению концентрации витамина Е в сыворотке крови в 1,7 раза (p<0,05), в дозах 0,18 и 0,24 мг на животное в сутки – в 1,5 раза (p<0,05) по сравнению с птицами, потреблявшими ОР.
Следует также отметить, достоверное увеличение концентрации витамина Е в желтке яиц перепелов II опытной группы на 4,29% (р<0,05) и очевидную тенденцию к повышению данного показателя у птиц остальных опытных групп по сравнению с контролем (таблица 4).
Таблица 4
Биохимические показатели перепелиных яиц
Table 4.
Biochemical parameters of quail eggs
Показатель | Группа | ||||
I | II | III | IV | V | |
Желток | |||||
Сухое вещество, г/кг | 527±6 | 525±8 | 526±11 | 526±8 | 519±7 |
Сырой протеин, г/кг | 143±17,3 | 142,2±9,2 | 136,6±12,4 | 136±4,6 | 136±4,8 |
Липиды, г/кг | 261±17,1 | 261,7±22,6 | 256,6±14,1 | 250±13,5 | 251,7±15,8 |
Витамин Е, мкг/кг | 60,6±0,7 | 63,2±1,6* | 62,6±1,7 | 62,1±1,6 | 62,3±1,8 |
Белок | |||||
Сухое вещество, г/кг | 125±3 | 124±3 | 124±3 | 124±3 | 124±3 |
Сырой протеин, г/кг | 92,1±1,92 | 91,8±1,26 | 91,2±0,92 | 91,7±1,25 | 92,3±0,87 |
Представленные результаты аналогичны данным полученным ранее (А.А.Шапошников и др., 2011) и свидетельствуют о большей сохранности жирорастворимых витаминов в организме птиц опытных групп. Поскольку других источников витаминов, кроме корма, в диете перепелов не было, есть основание предположить о протективном действии лютеина и зеаксантина в составе добавки на содержание этих витаминов.
Таким образом, можно отметить, что применение в диете перепелов добавки, содержащей растительные ксантофиллы в дозах: 0,06, 0,12, 0,18 и 0,24 мг на животное в сутки положительно влияет на обмен белков и сохранность жирорастворимых витаминов А и Е в организме птиц и яичном желтке, а также не оказывает отрицательного действия на содержание некоторых метаболитов липидного и минерального обменов.
Список литературы
1. Биохимия животных: Учебник для студ. зооинженер. и ветеринарн. ф-тов с/х ВУЗов / А.В.Чечеткин, И.Д.Головацкий, П.А.Калиман, В.И.Воронянский; Под ред. проф. А.В. Чечеткина. – М.: Высшая школа, 1982. – 511 с.
2. Болотников И.А., Соловьев Ю.В. Гематология птиц. – Л., 1980. – С.116.
3. Зайцев Ю.В. Биохимия животных. Фундаментальные и клинические аспекты: учебн. / Ю.В. Зайцев, Ю.В. Конопатов – СПб.: Лань, 2004. – 384 с.
4. Handelman, G. J. Lutein and zeaxanthin concentrations in plasma after dietary supplementation with egg yolk [Text] / G. J. Handelman, Z. D. Nightingale, A. H. Lichtenstein, E. J. Schaefer, J. B. Blumberg // Am. J. Clin. Nutr. – 1999. – Vol. 70, № 2. – P. 247–251.
5. Johnson, E. J. The Role of Lutein in Disease Prevention / E. J. Johnson, PhD J. Mayer // Nutrition in Clinical Care. – 2008. – Vol. 3, Issue 5. –P. 289–296.
6. Schalch, W. Possible contribution of lutein and zeaxanthin, carotenoids of the macula lutea, to reducing the risk for age-related macular degeneration: a review / W. Schalch // HKJOphtalmol. – 2000. – Vol. 4. – № 1. – P. 31–42.
7. Whitehead AJ., Mares J.A, Danis R.P. Macular pigment: a review of current knowledge. // Arch. Ophthalmol., 2000, № 124, p. 1038-1045.