ЛЮТЕИН И ЗЕАКСАНТИН СОДЕРЖАЩАЯ ДОБАВКА В ДИЕТЕ ПЕРЕПЕЛОВ: БИОХИМИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ В КРОВИ И ЯЙЦАХ
Aннотация
Ксантофилл-содержащая добавка из лепестков бархатцев и чашечек физалиса в рационе перепёлок оказала положительное влияние на процессы метаболизма и увеличивала концентрацию лютеина и зеаксантина в желтке яиц в соотношении близком 4:1.
В последние годы всё большее научное обоснование и популярность приобретают способы получения пищевых продуктов с заданным химическим свойством и биологической активностью. Данное направление «пищевого дизайна» даёт возможность получать так называемые функциональные продукты питания — обогащенные макро- и микроэлементами, эссенциальными жирными кислотами, витаминами, ксантофиллами и т.п. Особый интерес вызывают ксантофиллы — лютеин и зеаксантин, в связи с их биологической ролью в организме человека и животных. Оба каротиноида, лютеин и зеаксантин, называются «макулярными пигментами», т.к. они входят в состав жёлтого пятна (macula lutea) сетчатки глаза человека в соотношение приблизительно 4:1 [4, 6]. Антиоксидантные свойства данных ксантофиллов в сочетании с их способностью поглощать излучение синего спектра света, защищают пигментный эпителий и слой хориокапилляров сетчатки от повреждающего действия окислителей, свободных радикалов, нейтрализуя активные формы кислорода [7]. Учитывая тот факт, что каротиноиды не синтезируются в организме животных и человека и должны поступать с пищей, а также то, что биодоступность эфира лютеина яичного желтка многим выше, чем лютеина из других пищевых источников и лютеина, полученного путём химического синтеза [5], актуальным является получение функциональных продуктов питания, в частности, яиц птицы, обогащенных лютеином и зеаксантином. Проведенные ранее исследования по обогащению и перепелиных [1. 2. 3] яиц лютеином и зеаксантином, используя биологически активные растительные добавки, показали их положительное влияние на сохранность, продуктивность, яйценоскость, физиолого-биохимический статус птиц, а также накопление каротиноидов в желтке яиц.
Следует отметить, что в России биологически активные добавки аналогичного типа не производятся, поэтому разработки с целью создания собственных технологий актуальны, особенно в свете современных установок на замену импортных препаратов и на возрождение отечественной медицинской и фармацевтической промышленности.
Разработанная нами биологически активная добавка отличается от известных импортных сбалансированностью соотношения лютеина и зеаксантина.
Целью нашего исследования было изучение влияния различных доз ксантофиллов лепестков бархатцев (Tagetes erecta L.) и чашечек физалиса (Physalis alkekengi) на биохимические показатели крови перепёлок, а также химический состав их яиц.
Материалы и методы. Опыт был проведен в фермерском хозяйстве Ивнянского района Белгородской области в январе-феврале 2012 года на перепелках-несушках породы «Фараон», в котором было изучено влияние на организм птицы различных доз (при неизменном соотношение лютеина и зеаксантина – 4:1) смеси сухих лепестков бархатцев и чашечек физалиса в составе основного рациона (ОР).
Для эксперимента перепёлок в суточном возрасте разделили на пять групп по 20 особей в каждой. Продолжительность опыта составила 40 суток: адаптационный период – 10, основной – 14 и завершающий – 16 суток.
В подготовительный период птица I-V групп получала ОР. В основной период (продолжительность 14 суток) перепёлки контрольной (I) группы получали ОР; II группы опыта ОР с добавлением 0,06; III группы – 0,12; IV – 0,18; V – 0,24 мг ксантофиллов на перепёлку в сутки соответственно. В завершающий период, длительность которого составила 16 суток, вся подопытная птица получала только ОР.
Основной рацион был представлен специальным комбикормом для перепелок-несушек, сбалансированным по основным питательным, минеральным и биологически активным веществам. Потребление воды не ограничивали.
Для опыта были приготовлены высушенные и измельченные:
- лепестки цветков бархатцев, содержавшие по спектрофотометрическим данным 12,5±1,5 мг ксантофиллов на 1 г добавки (в пересчете на неэтерефи-цированный лютеин);
- чашечки физалиса, по спектрофотометрическим данным содержавшие 9,0±0,3 мг ксантофиллов на 1 г добавки (в пересчете на неэтерефицирован-ный лютеин).
Ежесуточно контролировали кормление птицы, её физиологическое состояние и яйценоскость. Цельную кровь забирали на 14 сутки основного периода путем декапитации птицы (по пять перепелок из каждой группы). Цельную кровь для определения концентрации эритроцитов, гемоглобина и лейкоцитов стабилизировали раствором гепарина (результаты опубликованы прежде). Сыворотку крови получали стандартно.
Образцы сыворотки доставляли незамедлительно в лабораторию и анализировали с использованием полностью роботизированного иммунохимического электрохемилюминисцентного автоматического анализатора COBAS E 411 и иммунохимического анализатора OLYMPUS AU680 на базе Белгородской областной клинической больницы Святителя Иоасафа.
Полученный цифровой материал был обработан статистически. При определении достоверной разницы между показателями контрольной и опытными группами был использован аргумент Стьюдента. Результаты рассматривали как достоверные, начиная со значения р<0,05.
Результаты и их обсуждение. Биохимические характеристики крови очень важны как для оценки физиолого-биохимического статуса организма животного и человека, особенно при использовании новых кормовых (пищевых) средств и биологически активных добавок.
Концентрация общего белка в сыворотке перепелок контрольной и опытных групп находилась в пределах физиологической нормы для данной возрастной группы птиц и не имела достоверных различий (табл. 1). Уровень альбумина и белков глобулиновых фракций перепелов контрольной и опытных групп, так же не имел достоверных различий. Это может свидетельствовать о том, что различные дозы ксантофиллов в диете перепелов не оказывают отрицательного влияния на содержание общего белка и белковых фракций в сыворотке крови птиц.
Уровень альбумина и белков глобулиновых фракций перепелов контрольной и опытных групп, так же не имел достоверных различий. Это может свидетельствовать о том, что различные дозы ксантофиллов в диете перепелов не оказывают отрицательного влияния на содержание общего белка и белковых фракций в сыворотке крови птиц.
Таблица 1
Биохимические показатели сыворотки крови, характеризующие белковый обмен у перепелок 24-суточного возраста
Table 1
Biochemical parameters of blood serum, characterizing protein metabolism in 24-day age quails
Показатель | Группа | ||||
I | II | III | IV | V | |
Общий белок, г/л | 51,3±3,3 | 51,1±2,3 | 49,9±2 | 53,4±3 | 52,8±2,4 |
Фракции белка, %: | |||||
альбумин | 58,3±2,3 | 57,6±2,2 | 58,7±1,3 | 59,1±1 | 59,1±0,8 |
α1-глобулины | 5,2±0,3 | 4,7±0,4 | 5±0,2 | 5,3±0,3 | 5,3±0,4 |
α2-глобулины | 9,7±0,8 | 9±0,9 | 9,3±0,8 | 9±0,6 | 9,2±0,3 |
β-глобулины | 19,7±0,4 | 19,7±0,9 | 20±0,4 | 19,3±1,8 | 19,5±0,9 |
γ-глобулины | 7,2±1,8 | 8,9±2,6 | 7,5±2 | 6,6±1,2 | 7±0,5 |
Мочевая кислота, ммоль/л | 270±14,3 | 229,3±9,7* | 233±8,2* | 244,7±17,8 | 244,4±8,7* |
Добавление к ОР птиц добавки в различной концентрации приводит к достоверному снижению концентрации мочевой кислоты в сыворотке крови птиц опытных групп, получавших растительные ксантофиллы в дозе 0,06 мг на животное в сутки на 15,1% (p<0,05), в дозе 0,12 мг на животное в сутки на 13,7% (p<0,05), в дозе 0,24 мг на животное в сутки на 9,5% (p<0,05). Полученные данные могут свидетельствовать, как об усилении синтетических процессов в обмене белков, так и об оптимизации работы выводящей системы птиц.
Такие показатели, как триацилглицеролы (ТАГ), холестерол, транспортные формы липидов – липопротеины высокой плотности (ЛПВП), липопротеины низкой плотности (ЛПНП), липопротеины очень низкой плотности (ЛПОНП), отражающие интенсивность метаболизма липидов в организме животного, у экспериментальных перепелов находились в пределах физиологической нормы для данной возрастной группы птиц и достоверных различий по показателями в контрольной и опытных группах не выявлено (таблица 2).
Наряду с показателями белкового и липидного обменов значимыми являются показатели минерального обмена. Наибольший интерес представляют макроэлементы кальций и фосфор как компоненты, присутствующие во всех тканях и органах и участвующих в ряде важнейших биохимических процессах. Уровень кальция и фосфора в сыворотке крови отражает обеспеченность ими организма птиц.
Таблица 2
Биохимические показатели сыворотки крови, характеризующие липидный обмен у перепелок 24-суточного возраста
Table 2
Biochemical parameters of blood serum, characterizing lipid metabolism
in 24-day age quails
Показатель | Группа | ||||
I | II | III | IV | V | |
Холестерол, моль/л | 2,27±0,3 | 2,11±0,22 | 2,34±0,32 | 2,22±0,18 | 2,21±0,2 |
ТАГ, ммоль/л | 0,53±0,06 | 0,53±0,07 | 0,52±0,07 | 0,52±0,09 | 0,48±0,08 |
ЛПВП, ммоль/л | 1,73±0,09 | 1,74±0,07 | 1,73±0,05 | 1,73±0,08 | 1,72±0,14 |
ЛПНП, ммоль/л | 0,48±0,02 | 0,49±0,04 | 0,49±0,08 | 0,48±0,03 | 0,47±0,05 |
ЛПОНП, ммоль/л | 0,31±0,04 | 0,28±0,02 | 0,27±0,03 | 0,27±0,01 | 0,26±0,01 |
Наряду с показателями белкового и липидного обменов значимыми являются показатели минерального обмена. Наибольший интерес представляют макроэлементы кальций и фосфор как компоненты, присутствующие во всех тканях и органах и участвующих в ряде важнейших биохимических процессах. Уровень кальция и фосфора в сыворотке крови отражает обеспеченность ими организма птиц.
Проведенные исследования показали, что добавление в рацион перепелов ксантофиллов в дозе 0,18 и 0,24 мг на животное в сутки ведет к достоверному (p<0,05) снижению концентрации кальция на 13,7 и 14,4% соответственно по сравнению с контролем (табл. 3). Уровень фосфора у птиц опытных групп также снизился по сравнению с контролем во II опытной группе на 7,77 (p<0,05), в III группе - на 21,8 (p<0,05), в IV группе -на 23,3 (p<0,001), в V группе - на 26,9% (p<0,01). Тем не менее, содержание указанных макроэлементов оставалось в пределах физиологической нормы, более того, отношение кальций/фосфор оставалось в оптимальном диапазоне - от 1,5 до 3,0 у перепелов всех опытных групп.
Таблица 3
Элементный состав и концентрация витаминов сыворотки крови перепёлок
Table 3
The element composition and concentration of vitamins in quail blood serum
Показатель | Группа | ||||
I | II | III | IV | V | |
Кальций, ммоль/л | 2,78±0,15 | 2,69±0,09 | 2,43±0,27 | 2,4±0,05* | 2,38±0,15* |
Фосфор, ммоль/л | 1,93±0,07 | 1,78±0,09* | 1,51±0,12* | 1,48±0,07*** | 1,41±0,03** |
Калий, ммоль/л | 11,3±0,9 | 10,9±0,7 | 10,9±0,3 | 10,6±0,6 | 10,9±0,4 |
Хлор, ммоль/л | 107,3±5,6 | 104,7±5 | 103,1±2,4 | 107,9±3,1 | 104±6 |
Витамин А, мкмоль/л | 0,85±0,05 | 1,03±0,06* | 1,14±0,07** | 2,03±0,06*** | 1,23±0,04*** |
Витамин Е, мкмоль/л | 0,006±0,001 | 0,01±0,001* | 0,01±0,002* | 0,009±0,002* | 0,009±0,001* |
В таблицах 1-3: * p < 0,05; ** p < 0,01; *** p < 0,001
Полученные данные можно объяснить интенсификацией минерального обмена у птиц опытных групп, конверсией макроэлементов в скорлупу яиц, что согласуется с результатами яйценоскости.
Помня об антиоксидантной роли ксантофиллов, вследствие наличия в молекуле сопряженных двойных связей, важно было изучить влияние добавки на содержание общеизвестных природных ингибиторов окисления - витамины Е и А в крови птиц. Как видно из таблицы 3, содержание ретинола и токоферола в крови перепелов всех четырёх опытных групп существенно и достоверно повысилась по сравнению с контролем. Так, концентрация витамина А в сыворотке крови птиц II и III опытных групп увеличилась на 21,2 и 34,1%, а в IV и V группах - в 2,4 и в 1,4 раза (p<0,01) соответственно по сравнению с контролем. Применение в диете перепелов растительных ксантофиллов в дозах 0,06 и 0,12 мг на животное в сутки, привело к достоверному повышению концентрации витамина Е в сыворотке крови в 1,7 раза, в дозах 0,18 и 0,24 мг на животное в сутки – в 1,5 раза по сравнению с птицами, потреблявшими ОР.
Следует также отметить, достоверное увеличение концентрации витамина Е в желтке яиц перепелов II опытной группы на 4,29% и очевидную тенденцию к повышению данного показателя у птиц остальных опытных групп по сравнению с контролем (рис. 1).
Рис. 1. Концентрация витамина Е в желтке перепелиных яиц, мкг/кг.
Fig. 1. The concentration of vitamin E in the yolk of quail eggs, µg/kg.
Представленные результаты аналогичны полученным ранее данным [2] и свидетельствуют о большей сохранности жирорастворимых витаминов в организме птиц опытных групп. Поскольку других источников витаминов, кроме корма, в диете перепелов не было, есть основание предположить о протективном действии лютеина и зеаксантина в составе добавки на содержание этих витаминов.
Таким образом, отмечаем, что применение в диете перепелок добавки (Патент РФ № 2328137, 2008г.), содержащей растительные ксантофиллы (сухие лепестки бархатцев и чашечки физалиса) в дозах: 0,06; 0,12; 0,18 и 0,24 мг на животное в сутки положительно влияет на обмен белков и сохранность жирорастворимых витаминов А и Е в организме птиц и яичном желтке, а также не оказывает отрицательного действия на содержание некоторых метаболитов липидного и минерального обменов.
Список литературы
1. Дейнека Л.А. Спектральный и хроматографический анализ ксантофиллов в различных растительных добавках и их влияние на накопление лютеина и зеаксантина в желтке перепелиных яиц / Л.А.Дейнека, А.А.Шапошников, В.И.Дейнека, Л.Р.Закирова, С.М.Вострикова // Научные ведомости Белгородского государственного университета. Серия: Естественные науки. 2010. № 21 (92). Выпуск 13. С. 143-149.
2. Дейнека Л.А. Влияние ксантофиллсодержащих растительных добавок на биохимические показатели крови, накопление лютеина и зеаксантина в желтке перепелиных яиц / Л.А.Дейнека, А.А.Шапошников, В.И.Дейнека, Л.Р.Закирова, С.М.Вострикова // Научные ведомости Белгородского государственного университета. Серия: Естественные науки. 2011. №21 (116). Выпуск 17. С. 53-56.
3. Дейнека Л.А. Пищевой дизайн: исследование накопления ксантофиллов в желтке куриных яиц / Л.А.Дейнека, А.А.Шапошников, В.И.Дейнека, С.М.Вострикова // Научные ведомости Белгородского государственного университета. Серия: Естественные науки. 2007. №5. Выпуск 5. С. 32-36.
4. Handelman G. J. Lutein and zeaxanthin concentrations in plasma after dietary supplementation with egg yolk [Text] / G.J.Handelman, Z.D.Nightingale, A.H.Lichtenstein, E.J.Schaefer, J.B.Blumberg // Am. J. Clin. Nutr. 1999. Vol. 70, № 2. P. 247-251.
5. Schalch W. Possible contribution of lutein and zeaxanthin, carotenoids of the macula lutea, to reducing the risk for age-related macular degeneration: a review / W.Schalch // HKJ Ophtalmol. 2000. Vol. 4. № 1. P. 31-42.
6. Whitehead A. J., Mares J. A, Danis R. P. Macular pigment: a review of current knowledge. // Arch. Ophthalmol. – 2000. – № 124. – P. 1038-1045.
7. Johnson E. J. The Role of Lutein in Disease Prevention / E.J.Johnson, PhD J.Mayer // Nutrition in Clinical Care. 2008. Vol. 3, Issue 5. P. 289-296.