Введение

На данный момент использования лекарственных средств на основе лекарственного растительного сырья очень возросла. Лечение растениями и фитопрепаратами издавна вошли в нашу жизнь и в настоящее время получило признание в медицине во всех странах мира. Немаловажным преимуществом лекарственных растений перед  синтетическими лекарственными средствами является присутствие в них наиболее естественного комплекса биологически активных веществ в более доступной форме.

Следовательно, это увеличивает потребность в растительном лекарственном сырье и вызвает необходимость изучения химического состава лекарственного растительного сырья, обоснованного использования лекарственных растений в медицинских целях.

Одним из эффективным способом расширения списка лекарственного растительного сырья является исследование с дальнейшим медицинским применением малоизученных видов растений, к числу которых относится растения рода медуница (медуница неясная (Pulmonaria obscura L.)). (рисунок 1).

Медуница неясная (Pulmonaria obscura L.). Pulmonaria obscura является многолетним травянистым растением, принадлежит к семейству Бурачниковые (Boraginaceae) высотой достигает 8-30 см, корневище толстое бурого цвета с придаточными корнями. Листовая пластина цельнокрайняя, короткожестковолосистая ,заостренная, могут быть  беловатые пятна. Цветки на коротких цветоножках собраны в немногоцветковые, парные завитки, могут быть собранные на верхушке стебля растения в соцветие щиток. Плод у медуницы неясной сухой орешек, который заключен в колокольчатую чашечку.  Наиболее распространенно в Центрально-Черноземной части России, является официнальной во многих странах и используется в качестве смягчающего, отхаркивающего, вяжущего средств. [10, 14].

В Центрально-Черноземной России произрастают медуница неясная и узколистная, у которых химический состав мало изучен [8, 11].

Целью настоящей работы явилось обосновать возможность использования листьев медуницы неясной в качестве будущего источника полисахаридных соединений. Разработать методику гравиметрического и количественного определения полисахаридов в листьях медуницы.

Материалы и методы исследования

Объектом исследования были листья медуницы неясной (Pulmonaria obscura Dumort.) Основываясь на литературные данные, ведущими группами действующих веществ растений рода медуница являются флавоноиды и полисахариды [9]. Исходя из этого для стандартизации  сырья «Медуницы листья» нами были разработаны методики количественного определения полисахаридов. Определение полисахаридов количественным методом в растениях рода медуница и проводили гравиметрическими [5, 9] и спектрофотометрическими [1] методами.

Спектрофотометрический метод  построен на измерении оптической плотности в видимой области продуктов взаимодействия моносахаридов, которые образовались  в результате гидролиза полисахаридов с хромогенными реактивами, такими как, например, в щелочной среде с пикриновой кислотой [1, 7].

Гравиметрический метод [9], является распространенным для анализа лекарственного растительного сырья, содержащего полисахариды, который основан на экстракции суммы полисахаридов из сырья и дальнейшим осаждением 95%-м спиртом этиловым.

Для дальнейшего анализа сырья нами разработана методика гравиметрического определения полисахаридов.

Разработка данной методики проводилась на одном образце медуницы неясной.

Были изучены стадии - это  условия осаждения и экстрагирование суммы полисахаридов

Наиболее продолжительной стадией при анализе полисахаридов из лекарственного сырья количественным методом является экстракция. Протекание экстракции полисахаридов зависит от следующих факторов: времени экстракции, от степени измельченности сырья, типа экстрагента, температуры экстракции,соотношения сырье-экстрагент.

В качестве экстрагента использовали воду дистиллированную для выделения полисахаридов [9, 13].

Измельченность сырья оказывает особое влияние на процесс экстрации. Наиболее оптимальное значение измельченности, равны 1-3 мм [6, 12]. Были проведены исследования влияния степени измельченности сырья на экстракцию суммы полисахаридов, полученные данные представлены в таблице 1.

Данные приведенные в 1 показывают, что наибольшее извлечение полисахаридов из сырья медуницы неясной достигается при степени измельчения до размера частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 1 мм.

Таблица 1

Степень измельченности листьев для экстрагирования суммы полисахаридов

Table 1

Thee degree of atomization of the leaves for extractable amounts of

polysaccharides

Для извлечения полисахаридов, по литературным данным, предложена многократная экстракция сырья водой [6, 9]. Нами была применена экстракция до полного извлечения полисахаридов из сырья в соотношении 1:10 (сырье-растворитель).

В таблице 2 показано, что при применение четырехкратной экстракции (4 раза по 30 минут) в течение 120 минут происходит полностью извлечение полисахаридов.

Таблица 2

Обусловленность содержания суммы полисахаридов от времени экстрагирования

Table 2

The dependence of the amount of polysaccharides on the time of extraction

В дальнейшем исходя из литературных источников для осаждения полисахаридов из водных извлечений мы брали 96%-й спирт этиловый [9].  Были проведены исследования оптимального соотношения спирта этилового и извлечения, обеспечивающего максимальное осаждение полисахаридов из извлечения. Результаты представлены в таблице 3.

По данным таблицы 3 полнота осаждения полисахаридов достигается при использовании четырехкратного количества 95%-го спирта этилового.

Таблица 3

Зависимость между полнотой осаждения суммы полисахаридов и объема спирта этилового 95%

Table 3

The dependence of the completeness of the precipitation amounts of the polysaccharides on the volume of ethyl alcohol

Проделанная работа по совершенствованию условий экстракции и осаждения полисахаридов дали нам возможность создать методику количественного определения полисахаридов в листьях растений рода медуница [3, 4].

Аналитическую пробу сырья измельчили до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 1 мм. Навеску 5,0 г измельченного сырья поместили в колбу вместимостью 250 мл, далее добавили 100 мл воды и присоединили к обратному холодильнику и затем кипятили на электрической плитке (водяной бане) в течение 30 минут. Экстракцию повторили трижды по 100 мл в течение 30 минут. Полученные водные извлечения объединили, затем центрифугировали при частоте вращения 5000 об/мин 10 минут и отфильтровали в мерную колбу 500 мл через пять слоев марли, которую предварительно смочили водой. Фильтр промыли водой и довели объем раствора водой до метки - получили раствор А.

Затем взяли 25 мл раствора А поместили в центрифужную пробирку, прибавили 100 мл 95% спирта этилового, подогрели на водяной бане температура 600 °С, 5 минут. Затем 30 минут центрифугировали с частотой вращения 5000 об/мин в течение получаса.

Полученную надосадочную жидкость подвергли фильтрации под вакуумом, остаточное давлении 13-16 кПа, через высушенный до постоянной массы при температуре 100-150 °С стеклянный фильтр ПОР 16 с диаметром 40 мм. далее осадок количественно перенесли на фильтр, затем промыли 15 мл смеси спирта этилового 95%-го и воды (3:1). Затем фильтр с осадком высушили на воздухе, при температуре 100-105 °С до постоянной массы.

Затем содержание полисахаридов в пересчете на абсолютно сухое сырье в % (Х) вычисляли по формуле:

Результаты исследования и их обсуждение

Данной методикой провели анализ листьев медуницы неясной собранных из различных мест произрастания и в различное время сбора сырья.

Полученные данные количественного определения суммы полисахаридов в листьях медуницы неясной приведены в таблице 4.

В результате, исходя из таблицы 4 мы видим, что содержание суммы полисахаридов варьирует в пределах от 9,63% до 10,98%. Следовательно установлены нормы содержания суммы полисахаридов не менее  9% [2].

Ошибка метода количественного определения суммы полисахаридов не превышает 4,74% (таблица 4).

Таблица 4

Содержание суммы полисахаридов в листьях медуницы

(n=5,   P= 95%)

Table 4

The content of total polysaccharides in the leaves of lungwort

(n=5, P= 95%)

Таким образом, разработана методика гравиметрического определения суммы полисахаридов для лекарственного растительного сырья «Медуницы листья». Содержание суммы полисахаридов в листьях медуницы неясной колеблется от 9,63% до 10,98%. Основываясь на эти данные, установлена норма содержания полисахаридов, не менее 9%.

Заключение

Лекарственные растения являются одним из источников получения новейших лекарственных средств. Исследование новейших лекарственных растений с перспективой формирования их дальнейшего употребления в медицинской практике и создания на их основе результативных фитопрепаратов для дальнейшего лечения, а также профилактики заболеваний, на данный момент, является одной из главных задач. Для решения поставленной задачи необходимо использовать опыт как народной медицины, так и новейшие достижения фармацевтической науки, практики.

Для реальной оценки качества листьев растений рода медуница разработаны методики гравиметрического определения суммы полисахаридов. Основываясь на полученные результаты можно говорить о перспективности данного вида сырья как источника полисахаридов и рекомендовать для дальнейших химических и фармакологических испытаний.