Введение Эфирные масла прочно заняли своё место среди аптечного ассортимента. Это в первую очередь обусловлено большой популярностью ароматерапии на сегодняшний день. Действительно, ценные органолептические и антисептические свойства данной группы соединений позитивно сказываются на психосоматическом состоянии и антибактериальной устойчивости организма человека. Чистые эфирные масла обычно внутрь не используются по причине их токсического характера. В организм человека они поступают при местном и внутреннем употреблении, в составе лекарственных растений и препаратов, причём нередко выступая в качестве носителей фармакологического действия. Известно, что наиболее часто лекарственные растения и препараты, содержащие эфирные масла, используются в качестве отхаркивающих и мочегонных средств.

В списке отечественных фармакопейных растений достаточно много объектов, у которых действующими являются эфирные масла. Одним из наиболее известных является можжевельник обыкновенный – Juniperuscommunis L.

Эфирное масло данного растения в значительных количествах содержится в надземных частях – шишкоягодах и хвое, меньше – в коре, древесине и корнях. Причём химический состав между различными частями растения характеризуется качественными и количественными различиями. В качестве фармакопейного объекта используются шишкоягоды растения [1].

Эфирное масло и дистилляты плодов J. communis L. содержат более 130 компонентов в составе которого преобладают бициклические углеводороды: α-пинен, мирцен, сабинен, лимонен и β-пинен [4,5,7].

Биологическая активность шишкоягод J. communisL. в значительной мере обусловлена эфирным маслом, которое в основном и определяет диуретический, желчегонный, антимикробный и отхаркивающий эффекты растения. Выделяясь через почки, эфирное масло умеренно раздражает их, оказывая диуретическое действие, и одновременно дезинфицирует мочевыводящие пути. Кроме того, оно усиливает секрецию бронхиальных желёз, тем самым, способствуя разжижению секрета, а также облегчает эвакуацию желчи из жёлчного пузыря [2,3].

Эфирное масло плодов J. communis L. обладает антибактериальным и фунгицидным действием в отношении ряда микроорганизмов, таких как Candida albicans, Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa [4].

В ряде экспериментов, в частности на модели дрожжевых грибов было показано, что эфирное масло J. communis L. обладает сильной антиоксидантной активностью благодаря блокированию окислительных процессов в клетках путем увеличения активности антиоксидантных ферментов супероксиддисмутазы, каталазы и глутатионпероксидазы [6,8].

Известно, что состав эфирного масла, даже внутри одного вида подвержен значительной вариабельности, что связано в первую очередь с экологическими особенностями произрастания растения: химический состав почвы, влажность воздуха, освещённость и т.д. [4,8] Поэтому и состав эфирного масла у разных экотопов может быть не одинаковым. Однако существует ряд маркерных компонентов, которые обусловливают принадлежность эфирного масла к определённому растительному объекту и кроме того характеризуют их качество.

Цель исследования - определение маркерных компонентов эфирного масла плодов J. communis L. для разработки норм качества лекарственного растительного сырья.

Материалы и методы. В качестве объектов исследования использованы образцы эфирного масла J. communis L., полученные из сырья, собранного в разных регионах Российской Федерации: Саратовской, Московской, Ленинградской и Новосибирской областей.

Для надёжного химического анализа такого сложного объекта как эфирные масла требуются гибридные методы анализа, сочетающие в себе как возможность разделения многокомпонентной системы, так и их достоверную детекцию. Поэтому в качестве аналитического инструмента нами использован метод газовой хроматографии – масс-спектрометрии. Измерение проводили на приборе хромато-масс-спектрометр модели GCMS-QP2010 Ultra, фирма-изготовитель «Shimadzu», Япония, регистрационный номер №46022-10. Тип средств измерений утверждён приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 28 декабря 2010 г. №5484.

Источник ионов масс-спектрометра работает в режиме электронного удара. Разделение ионов осуществляется квадрупольным масс-фильтром, детектирование – вторичным электронным умножителем с обращённым динодом. Детектирование может быть проведено в режимах селективного ионного детектирования (SIM), или по полному ионному току (SCAN) или в режиме одновременной регистрации SIM/ SCAN.

Разделение проводили на колонке:

Zebron ZB-5MS 30 m L × 0,25 mm ID × 0,25 μm df;

Жидкая фаза: 5%-polysilarylene-95polydimethylsiloxane;

Температурные пределы: от -60 С° до 325/350 С°;

Серийный номер № 238059.

Условия хроматографирования:

Газ-носитель ­– гелий с постоянным потоком  - 0,7 мл/мин;

Анализ осуществлялся в режиме программируемых температур:

Температура колонки программировалась в диапазоне от 70 С° (изотерма 2 мин.) – 230 С° (изотерма 5 минут). Скорость подъёма температуры 3 С°/мин

Температура испарителя – 240 С°;

Температура ионного источника – 250 С°;

Температура интерфейса – 250 С°;

Режим ввода пробы - с делением потока (Splitratio 1/50) – 1,5 мин;

Напряжение на детекторе – 0,7 - 0,84 кВ;

Поток эмиссии – 60 µА;

Объём вводимой пробы – 1µl.

Детектирование осуществляли в режиме полного ионного тока (SCAN) в диапазоне m/z 70 – 350 Da, со скоростью сканирования 769 и результирующим временем 0,4 сек. Расшифровку компонентного состава эфирных масел J. communis L. проводили с использованием библиотечной базы данных масс-спектров NIST 11.

Результаты исследования и их обсуждения

Результаты хроматографирования эфирных масел можжевельника из разных регионов Российской Федерации представлены на рисунках 1- 4.

Рис. 1. – Хроматограмма образца эфирного масла J. communisL. из Саратовской области 

Fig. 1. – Thechromatogram of the essential oil sample of J. communis L. from Saratov region

Рис. 2. – Хроматограмма образца эфирного масла J. communisL. из

Московскойобласти

Fig. 2. - The chromatogram of the essential oil sample of J. communis L. from

Moscow region

Рис. 3. – Хроматограмма образца эфирного масла J. communisL. из

Ленинградскойобласти

Fig. 3. - The chromatogram of the essential oil sample of J. communis L. from

Leningrad region

Рис. 4. –Хроматограмма образца эфирного масла J. communisL. из

Новосибирскойобласти

Fig. 4. − The chromatogram of the essential oil sample of J. communis L. from

Novosibirsk region

Результаты расшифровки компонентного состава эфирного масла J. communis L.  приведены в таблице 1.

Таблица 1

Химический состав эфирного масла шишкоягод J. communisL. из разных регионов России

Table 1

The essential oil chemical composition of J. communis L. cone from different regions of Russia

*- жирным выделены специфичные компоненты эфирного масла J. communis L.

Выводы:

Результаты, представленные в таблице 1, свидетельствуют о достаточно стабильном компонентном составе эфирного масла J. communis L., однако количественные показатели различных компонентов в разных регионах отличаются. При этом в составе эфирного масла можно выделить 4-х характерные групп терпенов: бициклические монотерпены, моноциклические монетерпены, моноциклические монотерпеновые спирты и бициклические сесквитерепны. Доминирующей группой являются бициклические монотерпены, а именно α- и β-пинены и камфен с значительным превалированием первого. Содержание α-пинена в эфирном масле в зависимости от региона варьирует от 30,0 до 60,0%. Концентрация β-пинена колеблется в диапазоне 8,0 – 15,0%. К минорным компонентам эфирного масла J. communis L. следует отнести моноциклические монотерпены в частности о-цимен и α-лимонен, моноциклические спирты - терпинен-4-ол, α-терпинеол, а также бициклические  сесквитерепны – лонгифолен и кариофиллен. Такой компонентый состав эфирного масла J. communis L. можно считать маркерным, что позволит отличить его от любого другого эфирного масла. Остальные компоненты эфирного масла находятся в следовых количествах. Борнилацетат найден только в одном образце эфирного масла, поэтому его не следует относить к специфическим компонентам.

Полученные результаты могут быть использованы для объективной оценки норм качества фармакопейного лекарственного растительного сырья – шишкоягод (плодов) можжевельника. Дело в том, что в действующей фармакопейной статье на плоды можжевельника в качестве одного из нормируемых качество показателей, является содержание эфирного масла, определяемое весо-объёмным способом, предусматривающим использование метода гидродистилляции. Однако такой подход, учитывая современные мировые тенденции фармацевтической науки, в настоящее время не может быть признан удовлетворительным, поскольку  не учитывает состав эфирного масла. Поэтому полученные нами результаты определения качественного и количественного состава эфирного масла плодов J. communis L. могут быть использованы для включения в нормативную документацию на указанное лекарственное растительное сырьё.